腺病毒实验技术服务

一、腺病毒服务简介
腺病毒(adenovirus)是一种无包膜的线状双链DNA病毒。它的宿主范围很广，既可感染分裂细胞，又可感染非分裂细胞。逆转录病毒在感染宿主细胞时，病毒基因组及其携带的外源基因独立于宿主基因组外游离表达，因此无插入突变性，*性更高。腺病毒载体的外源基因装载量较大、表达速度快，产生的病毒滴度高，因此已经被广泛应用于基础研究和基因**中。
辉骏生物使用的腺病毒包装系统包括一个穿梭质粒和一个辅助质粒，携带外源基因的穿梭质粒与含有腺病毒基因组(E1/E3缺失)的辅助质粒共转染包装细胞后，利用Cre-loxP重组酶切割系统，即可产生携带外源基因的非复制型重组腺病毒，重组效率大大提高。包装出的腺病毒液可直接感染宿主细胞，介导外源基因的瞬时、高效表达。
辉骏生物的腺病毒载体包含多种荧光标签(如GFP或RFP等)、多种抗性筛选标签和多种启动子，可充分满足客户不同实验设计的要求。
 
二、腺病毒表达系统的特点
1> 病毒基因不整合到染色体中，而是游离于宿主细胞染色体外瞬时表达，无插入致突变性；
2> 有广泛的宿主范围，对分裂期和非分裂期细胞均有感染作用；
3> 不需要转染试剂，操作简便，转染效率较高；
4> 外源基因装载容量大，可插入高达8kb的外源基因片段；
5> 能同时表达多个基因，可以将含有两个基因的双表达盒插入腺病毒转移载体中，或者用不同的重组病毒共转染目的细胞株来分别表达一个蛋白；
6> 病毒感染后，外源蛋白表达快，实验*。
 
三、腺病毒技术整体流程
A. 腺病毒载体的构建：根据客户的不同需要，将目的基因片段连接至腺病毒穿梭载体；
B. 腺病毒包装：腺病毒穿梭质粒与辅助质粒一起转染293细胞进行包装；收集富含腺病毒颗粒的细胞上清液，浓缩后进行滴度测试，得到滴度≥1×108 TU/mL的腺病毒液；
 
腺病毒服务流程
                                                                图1 腺病毒技术服务整体流程
四、腺病毒穿梭载体元件
       在腺病毒的包装系统中，腺病毒基因组质粒负责携带腺病毒的大部分骨架元件，穿梭质粒负责携带外源基因表达盒。两者共转染包装细胞后发生同源重组，携带外源基因的病毒基因组被包装，产生重组的腺病毒颗粒。辉骏生物提供的穿梭质粒可以插入多种不同的外源基因表达盒，具体元件如下所示，除此之外，客户还可以根据需要更换启动子、荧光基因或抗性基因。 
                             腺病毒元件图      
                                                          图2 腺病毒载体元件示意图
 
五、腺病毒技术服务项目
表1 腺病毒服务项目及内容
分类
服务编号
项目名称
客户提供
服务描述
基因过表达腺病毒服务
FG201
基因过表达腺病毒载体构建
目标基因的模板
构建载体
FG202
基因过表达腺病毒包装套餐
目标基因的模板
(1)构建载体
(2)腺病毒包装
microRNA腺病毒服务
FG211
microRNA过表达载体构建
microRNA前体或初始产物模板
构建载体
FG212
microRNA过表达腺病毒包装套餐
microRNA前体或初始产物模板
(1)构建载体
(2)腺病毒包装
RNAi腺病毒服务
FG221
RNAi腺病毒载体构建
目标基因登录号或序列
(1)设计并合成1条干扰序列
(2)构建载体
FG222
RNAi腺病毒包装套餐A
目标基因登录号或序列
(1)设计并合成3条干扰序列(保证至少有1个靶序列的干扰效率大于70%)
(2)分别构建3条载体
(3)分别进行3次腺病毒包装
FG223
RNAi腺病毒包装套餐B
设计好的有效靶点序列
(1)构建载体
(2)腺病毒包装
注: 可提供多条干扰序列
特别提醒：
（1）基因过表达腺病毒服务适用于目标基因长度为4000bp以下的片段，4000bp以上的请具体咨询；
（2）我公司亦可进行基因钓取和WB检测服务，但费用不包含在总套餐之内，需根据实际情况收费；
（3）客户如对所需病毒量及病毒液滴度范围有特殊要求需提前告知，我公司一般提供的病毒滴度在1×1011~1×1013 vp之间，规格为1mL；
（4）若实验材料为原代细胞和需要特殊培养的细胞，请具体咨询；
（5）客户亦可根据特殊要求进行腺病毒产品定制服务。
 
六、实验结果提交
实验结束后，我公司会提交完整的实验结果，包括：
1. 客户定制的相应载体或病毒液；
2. 腺病毒液滴度测定报告单；
3. 腺病毒载体的测序结果和峰图、引物序列、载体图谱；
4. 全部实验图片；
5. 详细实验报告。
 
七、实验周期及收费标准：咨询本公司