逆转录病毒实验技术服务

一、逆转录病毒服务简介
逆转录病毒是一种RNA病毒，其较基本特征是：在生命过程中，该病毒有一个从RNA到DNA的逆转录过程。逆转录病毒在感染宿主细胞时，会将自身基因组及其携带的外源基因整合入宿主基因组中，因此可以介导外源基因稳定、长期的表达。逆转录病毒DNA的整合是病毒RNA复制的必经阶段。只有当受感染的细胞处于细胞分裂期时，逆转录病毒的DNA基因组才能接触到宿主细胞内的遗传物质。因此，逆转录病毒只能在分裂中的细胞中复制。
辉骏生物使用的逆转录病毒表达载体基于莫洛尼鼠白血病病毒 (MMLV)，其基本骨架是pMXs，并带有多种可选的筛选标记。逆转录病毒包装细胞为Plat-E，其内含有病毒包装组分，因此只需转入单一的病毒表达载体即可包装出携带外源基因的病毒颗粒，操作更加方便。
但是需要注意的是，Plat-E包装出的逆转录病毒只能感染携带Slc7a受体的细胞, 因此仅适用于大鼠、小鼠的细胞系；若宿主细胞为其它物种的细胞，则需要首先用携带Slc7a受体基因的病毒感染该细胞系，使其携带Slc7a受体, 然后再用带有外源目的基因的病毒感染相应细胞系。
 
二、逆转录病毒表达系统的特点
1> 能将外源基因有效地整合入宿主染色体上，介导目的基因稳定、长期的表达；
2> 转染效率高，目的基因整合到宿主细胞基因组内的几率大大增加；
3> 可用于基因的过表达，诱导产生多潜能干(iPS)细胞系；
4> 建立稳转细胞株的时间较常规真核表达载体更短，能大大缩短实验周期、提高实验效率。
 
三、逆转录病毒服务整体流程
A. 逆转录病毒载体的构建：将目的基因片段连接至逆转录病毒载体；
B. 逆转录病毒包装：重组病毒质粒直接转染Plat-E细胞进行病毒包装，收集富含逆转录病毒颗粒的细胞上清液，浓缩后进行滴度测试，得到滴度为1×106~1×107 TU/mL的逆转录病毒液；
C. 稳转细胞株的建立：分别使用实验组和对照组逆转录病毒感染细胞，利用抗生素初步筛选稳定细胞株，细胞分选得到单克隆细胞株，建立实验组和对照组的稳转细胞株。
 
逆转录病毒服务流程
                                                                 图1 逆转录病毒技术服务整体流程
   
四、逆转录病毒载体元件
    辉骏生物的逆转录病毒载体如下，另外，客户还可根据需要更换启动子，荧光基因或抗性基因。
                                  逆转录病毒元件

                                                          图 2 逆转录病毒载体元件示意图
 
五、逆转录病毒技术服务项目 
表1 逆转录病毒服务项目及内容
分类
服务编号
项目名称
客户提供
服务描述
基因过表达逆转录病毒服务
FG301
基因过表达逆转录病毒构建
目标基因的模板
构建载体
FG302
基因过表达逆转录病毒包装套餐
目标基因的模板
(1)构建载体
(2)逆转录病毒包装
FG303
过表达稳转细胞株构建套餐
目标基因的模板
(1)构建载体
(2)逆转录病毒包装
(3)建立稳转细胞株
 
特别提醒：
（1）基因过表达逆转录病毒服务适用于目标基因长度为2000bp以下的片段，2000bp以上的请具体咨询；
（2）我公司亦可进行基因钓取和WB检测服务，但费用不包含在总套餐之内，需根据实际情况收费；
（3）我公司一般提供的病毒滴度在1×106~1×107 TU/mL之间，规格为1mL；
（4）Plat-E包装出的逆转录病毒只能感染携带Slc7a受体的细胞, 因此只适用于大鼠、小鼠的细胞系。
 
六、实验结果提交
实验结束后，我公司会提交完整的实验结果，包括：
1. 客户定制的相应载体、病毒液或稳转细胞株；
2. 逆转录病毒液滴度测定报告单；
3. 逆转录病毒载体的测序结果和峰图、引物序列、载体图谱；
4. 全部实验图片；
5. 详细实验报告。
 
七、实验周期及收费标准：咨询本公司