一、内容简介 microRNAs(miRNAs)是一类内源性的非编码RNA。编码miRNA的基因组DNA首先转录形成长的初始miRNA(pri-miRNA),后经Drosha核糖核酸酶切割形成发夹结构的、约70-90bp的RNA前体(pre-miRNA)。Pre-miRNA又被Dicer酶剪切成约20-25bp的单链成熟miRNA,进而发挥转录后调控作用。 miRNA过表达载体构建的主要原理是将pri-miRNA或pre-miRNA序列插入polII启动子下游。其中,pri-miRNA(含侧翼序列)的方式保留了每个miRNA特有的**双臂结构,效果较好。但对于pri-miRNA序列未知的miRNA,更便捷的方法是体外合成pre-miRNA,并构建到带有mir-30侧翼双臂序列的慢病毒载体中。当miRNA表达载体转入细胞后,可产生茎环结构的pri-miRNA或pre-miRNA,进而在细胞内源的miRNA加工机制下被剪切成成熟的miRNA。 二、技术优势 1、 用途广泛,既可被包装产生miRNA慢病毒,又可以质粒形式直接转染细胞而发挥调控作用。 2、 pri-miRNA法保留了miRNA的**双臂结构,更接近体内真实情况,效果较好。 3、 pre-miRNA法可直接合成pre-miRNA,免去了基因调取的流程,易于通量化。 三、服务内容 1、 合成pre-miRNA或调取pri-miRNA; 2、 目的序列与miRNA慢病毒载体的连接; 3、 连接产物的转化; 4、 测序验证; 四、服务须知 服务项目 客户提供 交付产物 实验周期 miRNA过表达慢病毒载体构建(pre-miRNA法) 1、pre-miRNA序列 2、*载体 1、miRNA过表达慢病毒载体 2、载体图谱、测序结果 2-3周 miRNA过表达慢病毒载体构建(pri-miRNA法) 1、携带pri-miRNA序列的质粒模板或pri-miRNA序列 2、*载体 1、miRNA过表达慢病毒载体 2、载体图谱、测序结果 3-4周 五、实验具体周期及费用:请咨询我司客服人员