亲和纯化/质谱 Affinity purification，AP/MS）

实验目的：寻找靶蛋白的互作蛋白
 
AP/MS服务简介：
        与常规Co-IP实验类似，只是亲和纯化法可不用引入抗体。将标签（如SBP）与特定基因融合表达，融合蛋白用链霉亲和素（strep）磁珠亲和纯化，经生物素洗脱，即可得到蛋白复合物。将实验组和对照组的洗脱蛋白分别做质谱，在实验组结果中扣除对照组中的蛋白，即可鉴定出与靶蛋白互作的蛋白。


AP/MS技术优势：
  1、得到的互作蛋白是细胞内与诱饵蛋白**互作的，符合体内真实生理情况，可信度高；
  2、不用抗体“拉取”互作蛋白复合物，避免了抗体的污染；
  3、所得洗脱液可直接酶解，进行质谱，减少了跑胶引起的蛋白损失。


服务内容:
  1、构建含SBP标签的靶基因表达载体质粒；
  2、目的细胞中过表达带标签的诱饵蛋白，细胞裂解液做WB检测表达效果；
  3、用strep微珠进行蛋白复合物的纯化和洗脱；
  4、实验组和对照组的洗脱液分别用胰酶酶解；
  5、LC-MS/MS，获得蛋白质的定性信息；
  6、结果分析与报告整理。


技术流程图：


服务项目	客户提供	结果交付	实验周期
AP/MS	1、诱饵基因的名称、序列、物种等相关信息或诱饵基因的cDNA模板等
2、待研究的细胞（保证细胞状态良好，易于用质粒转染）及其培养相关信息	1、构建好的真核表达载体
2、实验组和对照组蛋白的质谱鉴定结果
3、数据分析结果	预计2-2.5个月