2D Western blot实验技术服务

一、2D Western blot概述

        2D-WB是双向电泳与传统western blot相结合的一项技术。一般实验流程为抗原蛋白混合物经双向电泳分离，然后将凝胶蛋白转印至支持膜上，再通过抗体杂交显色。2D-WB技术可检测出抗原等电点或分子量发生的微小变化，在蛋白翻译后修饰研究领域有广泛应用；而2D-WB结合质谱鉴定技术，还可能从蛋白混合物中找到*原性更强的抗原。
 
二、技术服务流程

 
二、2D Western blot技术服务内容
  1、蛋白质抽提与定量；
  2、双向电泳；
  3、转膜，封闭，孵育，显示成像。
 
三、送样须知
    样本应避免各类污染和反复冻融，妥善保存，用干冰或液氮包装寄送；广州本地客户可上门收样。
    注：接收组织、细胞、蛋白质溶液等样品；相应一抗如果公司抗体库里没有，也需要客户自己提供。
 
四、2D Western blot技术服务报告内容
  1、蛋白质定量结果及电泳上样量；
  2、原始胶片、电子图片及图片分析结果；  
  3、2D Western blot完整的实验报告,包括实验步骤、使用仪器和试剂等。
 
五、2D Western blot实验服务案例

 
六、实验服务周期及收费标准：咨询本公司
 
七、质量承诺：提供清晰、客观的2D Western blot结果。
 
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附：2D Western blot实验步骤：
1、样本制备，尽可能溶解全部蛋白质，破坏蛋白与蛋白间的相互作用，避免其他杂质的干扰，与IEF兼容等。
2、双向电泳的主要步骤，**向电泳（IEF），胶条平衡，*二向电泳SDS-APGE。
3、*二向电泳结束后，取出凝胶进行转膜，可选湿法转移和半干法转移。常用NC膜和PVDF膜。
4、封闭，5%脱脂奶粉或5% BSA封闭1小时（室温）或过夜（4度）。
5、一抗孵育，根据抗体说明书选择孵育时间，常规的孵育条件是室温1小时或4度过夜，一抗孵育后取出膜TBST洗涤3次，每次5分钟。
6、二抗孵育：根据一抗选择合适的二抗（抗鼠、抗人、抗兔等），室温孵育1小时后取出膜TBST洗涤3次，每次5分钟。
7、显影：将A、B底物按比例稀释混合均匀后滴在膜上，暗室中将胶片置于膜上，盖上压片夹，曝光一定时间后将胶片放入显影液中进行显影，直到出现清晰的蛋白质条带，清水漂洗后在定影液中定影，曝光时间需综合考虑蛋白质的上样量，抗体稀释浓度，抗体孵育时间等。
8、定影后，清洗胶片，晾干，标定marker，扫描图片和2D Western blot图片分析。