蛋白互作专题实验系列*共沉淀

 

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蛋白质相互作用研究技术专题之*共沉淀
        蛋白质是分子功能的执行者，调控细胞中的所有生物系统。但是，通常它们不是“单打*斗”的，绝大多数的功能蛋白质会与其他蛋白质相互作用，一起调控生命过程。下面我们给大家介绍一下蛋白质相互作用研究中比较常用的一种技术——*共沉淀（Co-Immunoprecipitation，COIP）。


实验原理：COIP利用抗原抗体之间具有特异的*结合的原理，在细胞裂解液中加入特异性抗体，将抗原及与抗原结合的蛋白沉淀下来。*复合物可以通过western blot的方法验证抗原和其他蛋白之间的相互作用，也可以用质谱的方法，检测抗原的结合蛋白成员。
 
实验步骤：COIP实验是怎么做的呢？简单来说，COIP实验大概包括下面的几个流程：
构建表达载体，转染细胞（此步适用诱饵蛋白是外源性的，内源性的直接进入下一步骤）→温和条件下收集细胞裂解物→细胞裂解物与抗体孵育，洗去未结合的蛋白→用合适的洗脱液将诱饵蛋白及结合的互作蛋白复合物洗脱下来→western blot或者质谱分析
 
 



       COIP技术的优缺点：
优点：（1）得到的互作蛋白是细胞内与诱饵蛋白**互作的，符合体内真实生理情况；（2）实验条件温和，可避免人为的影响；（3）可分离得到**状态的相互作用蛋白复合物。
缺点：（1）不适用于结合力弱或者瞬间结合的蛋白互作研究。
COIP实验效果受多种因素影响，需要注意以下几点：
1.        首先是抗体的质量，需要选用IP级别的抗体；
2.        其次细胞数目，一次COIP实验建议使用2个10cm皿的生长至80%汇合度的细胞；
3.        细胞需用温和的裂解液提取蛋白，防止降解和人为修饰；
4.        务必设置对照，通常内源的蛋白可用Nomal IgG作为对照，外源的蛋白则用空载体转染细胞作为对照。
   结语：
COIP的技术暂时介绍到这里了，同学们如果对实验有什么疑问，欢迎拨打我们的免费热线4006991663，我们的技术客服人员将详细为您解答。


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